2022年12月13日，由上海市微生物学会微生物耐药防控专委会、CHINET中国细菌耐药监测网和复旦大学附属华山医院抗生素研究所牵头，中国老年保健医学研究会发起主办的“中国CRE检测能力提升及合理用药公益教育项目(MIC项目)之云监测启动会”在线上顺利召开。

会议由复旦大学附属华山医院抗生素研究所胡付品教授和重庆医科大学附属第一医院检验科夏云教授共同主持，邀请复旦大学附属华山医院丁丽老师、四川省人民医院黄湘宁教授、广州医科大学附属第一医院苏丹虹教授和新疆医科大学第一附属医院季萍教授就头孢他啶-阿维巴坦药敏试验和碳青霉烯酶表型检测多中心研究方案、CRE碳青霉烯酶检测、实验室与临床合作、耐药监测及数据上报注意事项等内容进行介绍。

在会议的开场，胡付品教授首先欢迎各位专家同道参加此项目，他表示许多实验室在进行碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌（CRE）检测时还存在许多制约因素，希望通过此项目能够推进革兰阴性杆菌中碳青霉烯酶的检测、规范头孢他啶-阿维巴坦药敏试验及操作注意事项，尤其是加强对头孢他啶-阿维巴坦耐药肠杆菌目细菌和铜绿假单胞菌的检测和筛选，以更好的协助临床医生应对碳青霉烯类耐药革兰阴性杆菌所致感染的挑战。夏云教授表示，当前CRE耐药已成为全球公共健康领域的重大威胁，对临床治疗提出许多挑战，临床的需求也非常迫切，希望通过此项目能规范检测要求与标准，提高临床抗感染诊疗水平，为CRE感染患者的诊治带去福音。

讲题一：头孢他啶-阿维巴坦药敏试验和碳青霉烯酶表型检测多中心研究启动会及方案介绍

丁丽老师以“头孢他啶-阿维巴坦药敏试验和碳青霉烯酶表型检测多中心研究启动会及方案介绍”为题目，对将于2023年正式启动的“头孢他啶-阿维巴坦耐药监测研究小组（Surveillance Group on Avibactam Resistance, Sugar）”开展的工作进行详细介绍。首先指出碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌因高耐药率、高死亡率、可选抗菌药物有限等特点，现已成为全球人类最紧急威胁。自头孢他啶-阿维巴坦在临床使用后，肺炎克雷伯菌为应对强大的环境压力不断发生变异，其中以产生KPC型碳青霉烯酶新基因亚型菌株的检出率大幅增加。现有研究结果显示，常规碳青霉烯酶检测方法往往无法有效检测KPC型碳青霉烯酶新基因亚型，目前亦尚未统一的对产KPC酶新基因亚型菌株所致感染的治疗方案。随后丁老师详细分享了头孢他啶-阿维巴坦药敏试验和碳青霉烯酶检测多中心研究，详细讲解了研究目的、入选标准、酶抑制剂增强试验检测碳青霉烯酶的过程、药敏试验判断标准、菌株运输注意事项等。完成菌株收集后，将进行药物敏感性试验（肉汤微量稀释法MIC）和全基因组测序（耐药基因、毒力基因、同源性及遗传环境分析），最后提出此项多中心研究的预期结果：规范头孢他啶-阿维巴坦药敏试验；了解肠杆菌目细菌和铜绿假单胞菌对头孢他啶-阿维巴坦的耐药机制；明确新KPC基因亚型在中国临床分离菌株中的分布及流行特征。

讲题二：CRE碳青霉烯酶检测及注意事项

四川省人民医院黄湘宁教授的分享聚焦在“CRE碳青霉烯酶检测及注意事项”上，黄教授简单介绍了CRE的定义、CRE的耐药机制、碳青霉烯酶分类。讲解了不同碳青霉烯酶实验室检测方法（包括表型检测和分子生物学检测的优缺点）以及CRE菌株处理流程；免疫层析法可能会出现蛋白提取液迁移速度慢，或难以迁移或难以迁移完全的情况，针对上述问题黄教授给出了两种解决方法。同时，黄教授亦分享了碳青霉烯酶酶型实验室检测实践体会：1例肺炎克雷伯菌亚利桑那亚种碳青霉烯类耐药案例提示细菌准确鉴定是前提；3例肺炎克雷伯菌案例提示酶抑制剂增强实验，抑菌圈直径差不一定≥5mm，KPC酶易出现添加硼酸后抑菌圈略扩大(<5mm)现象；1例大肠埃希菌酶案例提示厄他培南单药耐药通常为外排泵高表达，添加EDTA后导致抑菌圈扩大造成假阳性，建议抑制剂增强实验选择亚胺培南作为检测药物；1例肺炎克雷伯菌案例提示不要轻易修改药敏结果，认真求证。最后，黄教授总结到：没有完美的方法，清楚了解其局限性及解决方案才能为临床提供准确结果；酶抑制剂增强试验可(推荐检测药物为IPM)针对CRE菌株常规开展，同时检测头孢他啶/阿维巴坦以帮助判断；结果无法判读/矛盾时加做胶体金试验或GeneXpert-Carba R确认结果。

讲题三：实验室与临床加强沟通，共抗感染

广州医科大学附属第一医院苏丹虹教授带来了“实验室与临床加强沟通，共抗感染”，她首先指出微生物学科在合理使用抗生素中肩负着新的挑战，微生物室应不断与临床沟通携手抗感染，如：规范微生物标本采集；利用实验室先进设备精准检测病原菌；实验室要定期向临床发布本院、本地区细菌耐药监测数据；疑难病进行MDT会诊；把有效的实验结果变为高效信息用于临床诊治。苏教授分享了本院微生物学科在与临床沟通的特色及亮点：走进临床，密切与临床沟通，进行微生物送检及合理用药知识培训交流；对于疑难的感染患者微生物学科从临床和实验室两个角度考虑，找病原菌和找药；培训临床规范采集标本，加大了临床服务支撑；对疑难病原菌的检测，参与疑难病例会诊，提高了临床抗感染诊疗水平；2021年开展多形式专家门诊；举办多届“感染性疾病病原菌检测新技术新进展”学习班。最后总结到：多学科团队联合利用学科互补优势，建立更为科学、便捷的多学科诊疗体系；MDT各学科从不同专业、不同角度去分析病情，提出一系列对诊疗检测、鉴别及考虑可能性疾病感染；建立临床—微生物—影像—病理MDT诊治的重要性模式；耐药菌感染治疗面临的困境呼唤着实验室开展联合药敏试验。

讲题四：耐药监测及数据上报注意事项

最后，新疆医科大学第一附属医院季萍教授讲解了“耐药监测及数据上报注意事项”。她指出获取有科学价值的、分层的细菌耐药性及变迁资料，掌握全国细菌耐药性流行趋势及新威胁，为卫生行政部门制定相关政策及评估干预措施的有效性提供科学依据。（1）如何做好耐药监测：扩大监测网覆盖范围，完善监测网体系建设；在人、机、料、法、环方面提高耐药监测数据质量重要环节；微生物实验室负责人和负责细菌耐药监测数据上报人员的专业知识、学历、工作时间均有一定要求；实验室布局、设施、生物安全应与检测内容相适应；设置细胞离心机、组织碾磨器具等设备以及细菌培养、鉴定、药敏试验试剂等试剂；重要的培养基应进行质控（生长试验）。（2）数据上报注意事项：报告原则应注意单个高置信结果无需补充实验确认，但多个结果满足分值要求仍需要补充确认，切忌不能一概选择排在第一位的结果；浏览数据必须监测抗生素字段是否包含并填写数据；利用WHONET软件查看五种代表菌的抗生素上报数据折点是否覆盖；利用WHONET软件统计出重点耐药指标，是否有高出平均水平的耐药指标；通过质量报告预警罕见菌复查，提升数据质量。

讨论与总结

学术环节分享过后，夏云教授带领全体专家进行讨论。各位专家集中的主要意见包括如下：（1）鉴于KPC型碳青霉烯酶新基因亚型已经在肠杆菌目细菌和铜绿假单胞菌中出现，本次多中心研究可适当扩大菌株纳入范围；（2）建议借助多中心平台，设立分中心，由其负责本地市基因型检测，进一步完善碳青霉烯酶表型或基因型检测筛查工作；（3）应规范数据上报、提升数据质量、发挥数据价值，从而发挥耐药监测的价值。

会议最后，夏云教授对以上专家的专业分享和讨论发言进行总结，他表示应规范数据上报的流程，提升数据质量，加强实验室与临床的沟通，共同抗击感染和耐药。胡付品教授表示，多中心研究的目的不仅为了提升耐药细菌的科研水平，更重要的是加强实验室与临床的沟通，协助临床医生挽救更多耐药菌感染患者的生命，希望通过此次会议可以共同提高我国临床微生物检验水平，协助临床共抗感染。